解冻细胞时，时间是最重要的因素。低温冷藏的细胞非常脆弱，需要轻拿轻放，并立即放入预热的培养基中。许多细胞类型偏好能使细胞紧密接触的环境。对于这种细胞，首先将解冻的细胞置入较小的培养容器中，如25cm2培养皿中，这样可以促进细胞适应培养基并快速生长。

    一些细胞类型比其他细胞类型对冷冻过程中使用的低温冷藏剂更敏感。对于这种细胞，更换培养基就非常关键。正常解冻细胞并将细胞置于培养基中。使细胞有充分时间从解冻过程中恢复，可以用数小时或过夜，具体取决于细胞对低温度冷藏剂的敏感度。

    对于贴壁生长细胞，从单层细胞培养中吸除培养基并用新鲜的不含低温冷藏剂的培养基替换原来的培养基。对于悬浮生长细胞，需要通过离心将细胞与培养基分离。将细胞重悬于不含低温冷藏剂的新鲜培养基中。刚刚解冻的细胞极其脆弱，解冻后立即离心会导致细胞破裂。给细胞时间来适应环境，从而可以降低细胞损失率。

    刚解冻的细胞可能需要过一段时间才能传代或进行特定的实验。细胞经过一段时间的适应之后，检查细胞的活力和密度以及是否有污染迹象。若细胞无污染，且细胞密度增加，则需要进行传代。此时，决定该细胞是否进行冷冻并按照相应计划操作。

    将细胞转入较大培养皿中生长，增加细胞浓度。可以再次进行冷冻，也可以开始新的培养。例如，从25cm2培养皿中降细胞转入较大的75cm2培养皿，并每天检查细胞生长情况和细胞活力。接下来，将75cm2培养皿中的细胞分成俩分转入俩个75cm2培养皿中细胞密度达到低温冷藏所需密度之后，传代后将剩余细胞低温冷藏。

    操作流程：

    1、降培养基预热到37°C，并置于超冷工作台或无菌环境中。取出培养皿、移液器和其他必要仪器并放入超净工作台。

    2、确定需要解冻的每种细胞的管数。一次只解冻一管细胞，以避免交叉感染和操作错误。在培养皿标签上标记相应信息，并在培养皿中添加适量的培养基。

    3、将细胞从存储罐中取出，并立即浸入37°C的水浴中；冷藏管浸入水浴中时睡眠只能到达管盖部位，避免漏水。在温水中晃动冷藏管，同时确保冷藏管盖子仍拧紧。

    4、解冻细胞达到75%后，将冷藏管转入超净工作台或其他无菌环境中。用酒精喷洗冷藏管，然后用洁净的纸巾将其擦干。

    5、小心拧干冷藏管盖子，用移液器从中吸出细胞悬液。移液器头不得碰到冷藏管边缘的任何部分，以降低污染几率。

    6、将细胞转入已添加的培养基的培养皿中，然后进行温育。