大部分细胞类型形成单层细胞贴壁生长,贴壁生长细胞传代时,必须破坏结合,形成单层细胞悬液从而进行传代。蛋白水解酶,如胰蛋白酶,可以破坏结合,形成单层细胞悬液从而进行传代。
胰蛋白酶溶液的制备有多种配方,包括 含有或不含EDTA(一种整合剂,可结合钙镁离子,使胰蛋白酶可以作用于细胞间和细胞与基质间的粘附因子)的溶液。胰蛋白酶和EDTA浓度越高消化溶液的消化能力越强,但可能增加细胞损伤的风险。高浓度的胰蛋白酶溶液在使用前应用单层细胞进行测试。
在无血清条件下,必须通过离心将胰蛋白酶与细胞分离,或使用大豆胰蛋白酶抑制剂使胰蛋白酶失活。或者,用非酶消化溶液,这种消化溶液可以通过多种鳖合物的混合物解离细胞,不需要用血清进行灭活或离心分离。