将骨髓瘤细胞和经抗原免疫过的淋巴细胞融合,可制备单克隆抗体。骨髓瘤是骨髓肿瘤,可以在细胞培养中永久生长。与淋巴细胞融合之后,得到的细胞能够维持生长并产生大量纯抗体。这些非常特异性的抗体与传统药物相比具有更好的疗效,因为药物即攻击外来入侵者也会攻击自身的细胞。但单克隆抗体只攻击靶分子,副作用很小甚至无副作用。
在正常条件下,细胞有俩种嘌呤和嘧啶合成通路:从头合成途径和补救合成途径。从头合成途径从新材料开始合成嘌呤和嘧啶,而补救合成途径将原有的核苷酸转化为可以重新使用的核苷酸。氨基蝶呤是一种叶酸拮抗剂,可作为二氢叶酸类似物阻断嘌呤和嘧啶的从头生物合成途径:细胞因核算合成被阻断而死亡。只有能够使用补救合成途径的细胞才能存活。
二氢叶酸还原酶可以将NADP的氢原子转移到二氢叶酸上得到四氢叶酸,在嘌呤、胸苷和蛋氨酸合成中它是一种必须的维生素辅因子、四氢叶酸是从头合成途径所必需的分子。
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶是一种通过补救途径使用细胞外来源次黄嘌呤作为前体合成嘌呤的酶。一些细胞,包括突变的骨髓瘤细胞,不能够使用补救合成途径,因为他们缺少HGPRT酶。因为叶酸是嘌呤生物合成所必须的分子,突变细胞只有从头合成途径,因此突变细胞不能在有安吉蝶呤的环境中存活。成功融合的杂交细胞可以通过补救合成途径合成DNA,因为脾细胞可提供HGPRT酶。次黄嘌呤和胸苷为DNA合成补救合成途径提供了嘌呤和嘧啶前体。
再生医学网专家告诉我们HAT培养基可以筛选成功融合的杂交细胞。培养基中所有自融合的突变骨髓瘤细胞或未融合的骨髓瘤细胞被除去后,就不在需要氨基蝶呤了,细胞可以用HT培养基进行培养。