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复合皮DEJ结构研究常采用的方法
时间:2014-09-29 13:12:10  作者:网站编辑  来源:复合皮移植
正常的组织器官是结构和功能的统一性,结构对功能起着决定性作用。
    正常的组织器官是结构和功能的统一性,结构对功能起着决定性作用。CS移植物也不例外,其优良的品质除真皮能有效重建之外,DEJ区结构在维持接近正常的表皮-真皮相互作用的微环境稳定,以及诱导基质和细胞成熟方面起着重要的作用。因此,DEJ区的表皮钉、真皮乳头、基膜带等结构的再生,是客观评价CS质量和功能指标的重要组成部分。
    正常皮肤真皮浅层结构疏松、基质含量适度、胶原纤细、有典型和密集的DEJ结构来确保皮肤的耐磨功能。基底膜带是DEJ区特征性超微结构的总称,是由多种成分组成的复杂区域,包括基底细胞的胞浆膜及膜内侧的半桥粒、透明带、锚丝、致密板和基底膜下纤维带。后者包括:锚原纤维、微原纤维束、胶原纤维和基质。复合皮功能的好坏往往巨鼎与其移植后形成上述结构的完整性,其中以真皮侧连接BM的锚原纤维在CS中的功能作用最引人注目。
     然而,单凭超微结构并不能全面反映DEJ结构和质量。这是由于正常皮肤DEJ区经由深陷的表皮钉和真皮乳头结构显著增加了真皮-表皮间的基接触面和连接结构,而瘢痕最典型的特征是丧失正常皮肤波浪起伏的BM和DEJ连接。目前,普遍认为皮肤的弹性、耐磨性和抗挛缩特性与基底膜带的完整性有关。相比之下,光镜下的表皮钉突出和真皮乳头结构却很少被关注。因此,要全面反映CS的DEJ结构质和量以及探讨其再生基质,就需要将皮肤移植物的外观质地与组织形态学结构改变和分子生物学的检测结果相结合,同步观察表皮细胞、BMZ和真皮3者之间所有变化细节。其中,光镜下的表皮钉突、BM和真皮乳头的形态和数量在某种程度上可更加全面地反应移植物的质量。
    目前,DEJ区分子生物学研究常用的观察指标有:Ⅳ型或Ⅶ胶原蛋白、层粘连蛋白、蛋白多糖、纤连蛋白、EBA抗原、BP抗原、整合素和细胞角蛋白等。根据其分布特征和表达水平,具体分析各指标对复合皮DEJ区结构再生、维持和重塑的意义。
    直接观察分离后的表皮和真皮界面上的连接结构,可从三维角度认识皮肤的DEJ区结构再生及其形态学特征。分离表皮和真皮常使用酸、碱、和盐等化学试剂、酶、反复冻融和机械性剥离等方法来进行。透明带是皮肤DEJ最薄弱的区域,也是中性蛋白酶水解作用的部位。姜笃银等采用2.5g/Dispase对CS进行处理,将获得结构完整的DEJ结构供解剖显微镜和扫描电镜观察。通过免疫胶体金方法对抗原物质进行组织块免疫标记和定位。在光镜下可看到表皮内面阳性细胞分布及其北京着色情况。扫面电镜下,DEJ区表皮钉和真皮乳头结构保留完整,其BMZ中的基底细胞的浆膜皱襞、基质、锚原纤维和基质清晰可见;表皮内面凹凸不平,在于真皮乳头对应的部位,相邻皮钉之间形成与弹头外形相仿的乳头孔结构,其大小在10um-200um之间,密集排列,但皮钉表面由基底细胞膜形成的皱襞远低于乳头孔内,均呈螺纹状排列;真皮表皮有与表皮内面乳头孔大小一致的、近乎垂直外凸的乳头结构,乳头表面可见绒问状细密的锚原纤维,相邻乳头之间的区域连接纤维稀少。
关键字:复合皮
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