为减轻冷冻对阻止或细胞的损伤,在拟冻存皮肤前必须经抗冻剂做抗冻处理。经加工的皮片,在无菌层流工作台铺平,测量面积,编号、登记、系上标签,然后放入0℃的抗冻液内。
目前使用最为广泛的和作用较好的二甲基亚砜和甘油。慢冻储皮法常用的抗冻液为10%DMSO-磷酸缓冲液,浸泡15min。速冻玻璃化储皮采用20%DMSO浓度,浸泡30min。甘油抗冻液常用15%的浓度,在0℃-4℃条件下浸泡15-30min。每次储皮因皮片的面积较大和块数较多,不可能一次同时处理完毕,为了准确掌握皮片在抗冻液中浸泡的时间,可间隔地放入抗冻液,即每隔3-5min放入一块皮片。
然后按时一次取出,在进行下一步操作。可以保证每块皮片在抗冻液中的浸泡时间基本一致。若皮片在抗冻液中浸泡时间不足,则难达到抗冻目的;若时间过长,则会影响皮片活力。浸泡中,抗冻液必须只能用一次,用后废弃。在操作过程中,应保持抗冻液在0℃左右。为了延长异体皮地存活时间,减轻排斥反应,亦可用激素浸泡。也可用紫外线照射皮片,以减少皮片表皮的朗汉斯细胞数量,可降低皮片的抗原性。