表皮细胞培养方法根据取材方式不同分为两大类型：一是组织块培养法，二是细胞悬液培养法。俩种方法各有利弊：组织块培养法，操作简单，易于实施，单面积扩增较快，一般经一次后代所得膜片可增至数百倍至一千倍，但操作要求严格。

　　随着细胞培养技术的发展和进步，目前表皮细胞的培养方法主要以下几种：

　　1、滋养层培养法：由Rheinwald1975年建立，其特点是以小鼠3T3细胞作滋养层，并使用含胎牛血清的培养液。该法优点是培养的表皮细胞增殖速度快，传代好;缺点为3T3细胞为异种细胞，可产生对机体不利的代谢产物喝抗原，培养液中的胎牛血清蛋白喝培养的表皮细胞膜结合，易导致植皮后的排斥反应，故这种方法目前很少应用。

　　2、无滋养层培养法：特征是无滋养层细胞，使用无血清的培养液，表皮细胞可直接于培养皿底部进行增殖。该法操作方便，形成膜片时间早，没有异种蛋白影响。目前该方法应用较广泛。

　　3、气-液界面培养法：传统的表皮细胞培养法是使细胞于培养液面以下生长，这在一定程度上阻碍了表皮细胞生发层的自然分化喝基底膜的形成，而气-液面培养法应用异种真皮活真皮替代物作为基底物质，活在培养基中接种成纤维细胞形成真皮类似物，而后在其表面接种自体表皮细胞，并升至气体-液体界面处培养。表皮细胞大多数暴露于空气中，在近似生理的条件下，得到充分的分化，最终形成具有表皮层和类似真皮结构的皮肤类似物。移植后可达到长期存活的目的，且创面愈合后平滑、光亮、美观。与传统培养法相比，该法培养的表皮细胞角化程度增大，具有半桥粒喝基底膜结构，代表了表皮细胞培养技术发展的新方向。