随着细胞培养技术的发展和进步，目前表皮细胞的培养方法主要有以下几种：

　　1、滋养层培养法

　　由Rheinwald 1975年建立，其特点是以小鼠3T3细胞作滋养层，并使用含胎牛血清的培养液。该法优点为培养的表皮细胞增值速度快，传代好；缺点为3T3细胞为异种细胞，可产生对机体不利的代谢产物和抗原，培养液中的胎牛血清蛋白和培养的表皮细胞膜结合，易导致植皮后的排斥反应，故这种方法目前很少应用。

　　2、无滋养层培养法

　　特征是无滋养层细胞，使用无血清的培养液，表皮细胞可直接于培养皿底部进行增殖。该法操作方便，形成膜片时间早，没有异种蛋白影响，目前该方法应用较广泛。

　　3、气-液界面培养法

　　传统的表皮细胞培养法是使细胞于培养液液面以下生长，这在一定程度上阻碍了表皮细胞生发层的自然分化和基底膜的形成，而气-液界面培养法应用异种（体）真皮或真皮替代物作为基底物质，或在培养基中接种成纤维细胞形成真皮类似物，而后在其表面接种自然表皮细胞，并升至气体-液体界面处培养。表皮细胞大多数暴露于空气中，在近似生理的条件下，得到充分的分化，最终形成具有表皮层和类似真皮结构的皮肤类似物。移植后可达到长期存活的目的，且创面愈合后平滑、光亮、美观。与传统培养法相比，该法培养的表皮细胞角化程度增大，具有半桥粒和基底膜结构，代表了表皮细胞培养技术发展的新方向。