1、采集

　　采用基础培养液EBM-2（DMEM、EGM-2）、M199进行培养，少数情况下应用RPM111640、IMDM长周期培养液和条件培养液，胎牛血清浓度一般为5%~20%，同时添加不同种类的细胞生长因子，如血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞因子、牛脑提取物和表皮生长因子（EGF）等。最近国外报道，将分离的EPC用添加特殊生长因子的EBM-2培养液在特殊辅层（如纤维连接蛋白）上进行培养效果较佳。培养皿包被人纤维连接蛋白或胶原可使EPC更好地生长，人纤维连接蛋白的作用强于胶原，并有促进EPC分化的作用。大量研究报道显示，浓度为25~50mg/L的纤维连接蛋白可使细胞良好贴壁和产生细胞分化的形态特征。相关实验显示，（3~5）*106/cm2的接种密度使每106个单个核细胞得到的贴细胞数和细胞集落数最多。

　　2、分离纯化

　　有差速贴壁法、免疫磁珠法、流式细胞仪分类筛选法、生物素-抗生素亲和吸附法、单抗铺展贴壁法等。

　　每种方法各有优缺点：

　　①免疫磁珠法：得到的细胞纯度高，但细胞数少，分化差，费用昂贵；

　　②贴壁选择法：操作简单、方便，但得到的细胞纯度低。

　　目前多用单个核细胞贴壁法培养获得EPCs。

　　3、保存

　　收集生长良好的细胞，取少量细胞悬浮液计数细胞浓度及冻前存活率。将细胞加入到含10%DMSO和30%血清的新鲜培养基中用无菌塑料冷冻保存管放入到程序降温盒中，保持-70℃，24h后转入液氨保存。