将从吸脂术中分离得到的ADSCs,在体外经过两步诱导,将其转化为具备一定肝细胞功能的细胞。
第一步,在DMEM中加入肝细胞生长因子、重组牛碱性成纤维细胞生长因子和维生素B3;
第二步,在DMEM中加入抑瘤素M和地塞米松。诱导后可以观察到转化后的细胞在形态上变为立方状或者圆形,表面表达CD13、CD90和 CD105,通过RT?PCR检测细胞内有CK18、CK19、清蛋白、细胞色素2E1、增强子结合蛋白β等的基因表达。
当ADSCs向肝细胞转化时,其细胞形态、胞质内容物和基因表达均发生了极大的改变。为了检测其转化程度,现在常用以下几种检测指标。①形态学观察:细胞从诱导的第3天开始,逐渐变成立方状或者圆形,且贴壁能力减弱,换液中会有部分细胞脱落。②AFP:AFP在胎肝中表达水平较高,随着肝脏的发育成熟,其表达量减少甚至消失。因此,AFP不是成熟肝细胞的表面标志。一般在诱导后的7d内,AFP会检测到高表达,14 d以后表达量就会逐渐降低。③CK18和清蛋白:这两项为肝细胞比较特异的标志,可以用免疫荧光或者DAB方法检测到它们的量逐步升高。④低密度脂蛋白(LDL)摄取试验:LDL与胆固醇结合,由细胞摄取利用。
大部分LDL在肝脏内代谢,因此诱导后的细胞会在28 d左右开始摄取LDL。⑤尿素合成试验:正常情况下,尿素主要是由肝细胞合成的。诱导后的细胞分泌尿素时会呈现时间依从性。