早在 1909 年, Ehrlich 就提出免疫监视的概念, 1967 年 Burnet 提出了免疫监视学说。“免疫监视”学说认为,免疫系统可监视肿瘤的发生并通过细胞免疫机制清除肿瘤细胞。利用 DC 的这些功能,将肿瘤相关抗原物质在体外负载 DC ,再回输患者,从而激活患者体内免疫效应细胞,如 CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞,对表达肿瘤抗原的肿瘤细胞进行杀伤,同时产生免疫记忆细胞,长期维持免疫记忆和清除肿瘤细胞的功能。目前,国内外 DC 免疫治疗已经开展了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验,用于各种肿瘤的治疗,包括恶性黑色素瘤、前列腺癌、结肠癌、多发性骨髓瘤、乳腺癌、肾癌、肝癌、神经胶质瘤、肺癌、宫颈癌、艾滋病等。
⑴ 人外周血来源树突细胞的体外诱导培养
DC细胞(Dendritic Cell,树突状细胞)是人体内功能最强的专职抗原递呈细胞,其抗原递呈能力是巨噬细胞的10-100倍;然而,DC在人体含量甚微,因此在体外大量诱导培养 DC 是其应用于临床治疗的前提,本实验室首先将DC的前体细胞-单核细胞从外周血单个核细胞中纯化出来,然后在体外无血清培养基中补充人重组细胞因子GM-CSF,IL-4以及TNF- α进行培养,得到具有典型DC形态、表型和功能的DC。
⑵ 人外周血来源树突细胞的体外无血清培养条件的优化
为避免使用异源血清,本实验室已利用无血清培养基并补充自体血浆进行了 DC 培养条件的优化,无血清培养得到 DC 的效率低于有血清(胎牛血清)培养条件,但其安全性大大提高,且 DC 在功能上与有血清培养没有差异。
⑶ 人外周血来源树突细胞体外培养后的安全性研究
对外周血单核细胞诱导培养 DC 过程中、 DC 终产品分别进行无菌检测,检测内容包括支原体、细菌、真菌、类毒素,检测结果均为阴性;对培养得到的 DC 进行遗传稳定性检测,如染色体核型,核型未出现异常。
⑷ 人脐血来源树突细胞的体外诱导培养
脐血中也含有丰富的 DC 前体细胞,我们用相同的培养方法也可以从脐血中诱导培养得到具有功能的非成熟或成熟 DC
⑸ 人脐血来源树突细胞对乳腺癌移植裸鼠模型治疗作用的研究
由于脐血来源 DC 免疫原性较低,故动物实验中我们选择脐血来源树突细胞对乳腺癌移植裸鼠模型进行 DC 的免疫治疗,来检测 DC 免疫治疗的安全性和有效性。首先,我们对实验小鼠进行人乳腺癌细胞接种,待小鼠皆成瘤后,对其进行相关的治疗。实验分为手术后联合 DC 免疫治疗组及其对照组,化疗后联合 DC 免疫治疗组及其对照组。治疗效果可见下图,可以看出,各种常规治疗(包括手术和化疗)结合 DC 免疫治疗组小鼠肿瘤生长最缓慢,生存期最长,肿瘤复发率最低。提示在人类常规治疗肿瘤的基础上,联合生物治疗 - 如 DC 免疫治疗的方案,可能改善肿瘤患者的生活质量,延长生存期,降低复发率。