1、集落的种类：不同细胞来源的集落其形态和大小均有所不同,具体见表6-4.

    2、各种集落的培养步骤：各种造血细胞集落的培养条件有所不同,但其培养过程大致相似,操作步骤大致如下.分离所要培养的细胞,制成单个核细胞悬液.配制相应的培养体系.按比例将细胞因子、营养素以及血清等加入到培养基中形成特有的培养体系,培养体系最好在37℃水浴中保温10min.
   
    将琼脂等支持物煮沸融化,如是甲基纤维素则不需此步骤,待融化的支持物温度降到40℃时,加入培养系混匀.将充分混匀的培养体系加入培养皿或培养板的孔中,一把种3个复孔.将培养皿或培养板置于37℃、5%CO2饱和湿度环境下培养.观察结果,不同的集落计数的时间有所不同,详见下述.

    3、粒-单核-巨噬系细胞集落的培养：
   
    以往CFU-GM培养的刺激物多用人白细胞、胎肌以及胎盘裂解液作为条件培养基等,现多用造血生长因子替代.这些细胞因子包括GM-CSF、G-CSF、M-CSF以及IL-3等,但常用GM-CSF.培养基多用IMDM,RPMI等,培养基常用琼脂以及甲基纤维素,但效果前者较好.
   
    培养体系包括20%-30%胎牛血清,50ng/mlGM-CSF,细胞悬液中细胞总数一般以（1-2）X10^5/ml为宜,其余用IMDM或RPMI补齐,但保持琼脂终浓度为0.3%,甲基纤维素终浓度为0.9%-1.0%.细胞一般置于直径为33mm的培养皿或6孔板中,于37℃、5%CO2饱和湿度环境下培养.

    集落计数：一般培养10-14天观察集落,大于40个细胞的细胞团为一个集落.集落形态：一般CFU-GM的形态分3种.致密型：细胞紧密成团,细胞个体较小,对为粒细胞为主的集落.混合型    细胞团中央为紧密成团的粒细胞,周围弥散分布着单核细胞或巨噬细胞.松散型：细胞团比较均匀地分散,细胞个体较大,多为单核细胞和巨噬细胞组成.

    4、红系集落的培养：

    （1）集落培养体系    CFU-E的培养需要EPO,BFU-E的培养需要PHA-LCM、再生障碍性贫血患者血清或IL-3等,培养基主要为IMDM,几种培养体系见表6-5.

    （2）培养方法    配制好的体系加入直径为33mm的培养皿或6孔板中,37℃、5%CO2饱和湿度环境下培养.
 
    （3）集落计数   一般CFU-E在培养的第5-7天观察计数,大于8个细胞的细胞团为一个CFU-E集落.BFU-E在培养的第14天计数,大于50个细胞组成的细胞团或3个中心以上的细胞团为一个BFU-E集落.

    （4）集落的鉴定   在倒置显微镜下,CFU-E及BFU-E集落一般呈鲜红色,易于和其他集落比较.

    应用集落染色法进行鉴定.因为红细胞的血红蛋白具有类似过氧化物酶的作用,可使二甲基联苯胺和过氧化氢反应而形成棕红色,借此可与其他集落相鉴别.首先称取1g二甲基联苯胺,融解于100ml无水乙醇中,配制成1%二甲氧基联苯胺溶液,再配制H2O2工作液,即在0.9ml的蒸馏水中加入0.ml75% H2O2.

    染色工作液的配制：每5ml1%的二甲氧基联苯胺溶液中加入H2O2工作液0.2ml并混匀.染色时首先在培养物中加入适量的PBS或生理盐水,10-15min后,加入染色工作液,染色10-15min后,在倒置显微镜下观察计数染色成红色的集落为红系集落.