关键词: 质粒pEGFP-N1;耳边缘细胞
作者: 杨阳,孔维佳,李隽,胡钰娟,钟毅,郝亚楠,赵学艳,彭炜
作者单位: 中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉-头颈外科(武汉 430022)
摘要:
目的 通过病毒与非病毒载体对原代培养的新生大鼠内耳血管纹边缘细胞转染情况的比较,选择出适合边缘细胞的基因治疗载体。方法 用质粒(pEGFP-N1)、血清5 型重组腺病毒(rAd5)以及血清2 型重组腺相关病毒(rAAV2)三种载体转染新生大鼠(≤ 72小时)耳边缘细胞,通过对转染效率、细胞凋亡以及细胞活性的检测将三种载体加以比较。结果 对边缘细胞的转导效率依次为rAd5 > rAAV2 > pEGFP-N1,AnnexinⅤ- APC/7-AAD双染法检测转染阳性细胞的损伤情况依次为rAAV2 < rAd5 < pEGFP-N1,CCK-8法检测转染后的细胞活性依次为rAAV2 > rAd5 > pEGFP-N1。结论 病毒载体相对于非病毒载体以其高转导效率、低细胞毒性在对原代培养的新生大鼠耳边缘细胞的转染中表现出明显优势。与血清2 型重组腺相关病毒比较,相对高效、低毒性的血清5 型重组腺病毒更适用于原代培养的新生大鼠血管纹边缘细胞的基因转染研究。