1 SD大鼠PDLF的体外培养及扩增
将12周健康雄性SD大鼠的下颌骨取下，体外将磨牙区的牙龈及其他软组织刮除干净后小心拔出第一磨牙，随即在无菌条件下用含抗生素的PBS液冲洗，以除去血液。1%I型胶原酶消化1h，将牙取出，离心，弃上清;加入DMEM培养液（内含10%小牛血清，青霉素100U/mL，链霉素100μg/mL）制成细胞悬液，在体积分数为0.05的CO 2 孵箱中培养，待细胞贴壁后隔日换液。取生长状态良好的第4代细胞用于实验。
2 材料制备
国产胶原膜BME-10X主要成分为牛I型胶原。该膜半透明，表面不光滑，呈绒毛状，具有多孔网状结构，孔径大小不一。实验时将材料制备成4mm×4mm，环氧乙烷消毒过夜，紫外灯照射30min，置24孔板内DMEM预湿2h后接种细胞。
3 SD大鼠PDLF与BME-10X复合培养
0.25%胰酶及0.1%EDTA将状态良好的4代细胞消化下来，调整细胞浓度至5×10 6 mL -1 ，接种于材料上，每块接种20μL，置于37℃孵箱中，2h后加培养液2mL，以后每3d换一次培养液。体外复合培养10d后植人SD大鼠颅骨皮质骨表面。
4 SD大鼠颅骨皮质骨表面埋植
选用雄性SD大鼠（12周龄，体质量280～300g）18只。实验随机分为BME-10X组、骨膜刮除组和SD大鼠PDLF与BME-10X复合组，每组6只。将动物用35mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，常规消毒铺巾，在颅骨前缘弧形切开皮肤、皮下和骨膜，向后翻起皮肤及软组织，将骨膜刮除。生理盐水冲洗后，SD大鼠PDLF与BME-10X复合组将PDLF与BME-10X复合物植入实验动物颅骨皮质骨表面，缝合皮肤;对照组包括BME-10X组及骨膜刮除组，BME-10X组植入不复合细胞的材料，而骨膜刮除组则在刮除骨膜后直接缝合皮肤。
5 组织学观察
分别于第3周和6周从各组SD大鼠中随机处死3只。取出颅骨及材料复合物，4%多聚甲醛固定，脱钙后常规石蜡包埋制备7μm厚的切片，常规苏木精-伊红染色，二甲苯透明，封固。
