(1)收集病例及相关蜡块,切片作HE染色,复核诊断,在玻片和相应蜡块上选择典型区域作好标记。

    (2)芯片的设计:根据研究目的和待检测样本的数目对点阵的布局进行设计,并制作出与阵列二维位置相应的表格。

    (3)受体蜡块的制备:制作组织芯片的受体蜡块需要有较好的硬度和柔韧度,通过反复尝试最终选用熔点为57~58 ℃的石蜡,并经3次沉淀去除杂质。

    (4)芯片蜡块的制备:先在受体蜡块上用细针划出网络格,然后按预先的设计进行打孔,孔径0.75 mm,间距0.5 mm。从供体蜡块上标记的典型区域钻取组织,每个区域钻取3个组织芯,用针芯小心的将组织芯推入先前打好孔的受体蜡块中,并用镊子柄将其轻轻按平,如此反复制成芯片蜡块。将制好的芯片蜡块置于37 ℃温箱中30 min,待适当软化后用玻片轻轻将组织芯压平,而后用金属包埋框包好放入60 ℃温箱中40 min,使组织芯和周围蜡质相互融合。

    (5)切片及切片前后的处理:切片前将蜡块置于-20 ℃冰箱内30 min,使蜡块冷却变硬,易于切片。使用一次性切片刀进行快速连续切片,切片厚度4 μm。切片置于凉水中自然展开,再移入38~40 ℃的温水中展片并裱于经10％多聚赖氨酸处理的载玻片上,室温下晾干后,在65 ℃展片器上充分烤片30 min,后移入60 ℃温箱内过夜。取出冷却后置于-20 ℃冰箱贮存,而芯片蜡块置于4 ℃冰箱贮存。

3 结果

    经免疫组织化学和银染色过程,绝大多数组织芯能较完好的保存,网状纤维银染色结构清晰(图1)。免疫组织化学阳性信号清晰、背景清洁,且阳性结果和普通切片免疫组织化学阳性结果基本一致。