表皮细胞培养方法根据取材方式不同分为俩大类型：一种是组织块培养法，二是细胞悬液培养方法。

    组织培养法操作简单，易于实施，但是面积扩增效果有限，培养过程中很难得到完全不残留孔隙的完整细胞膜片。

    细胞悬液培养方法，面积扩增较快，一般经一次传代后所得膜片可增加至数百倍甚至一千倍，但操作严格。

    随着细胞培养技术的发展和进步，目前表皮细胞的培养方法主要有以下几种：

    1、滋养层培养法 其特点是以小鼠3T3细胞做滋养层，并使用含胎牛血清的培养液。该方法的优点为培养的表皮细胞增殖速度快，传代好；缺点为3T3细胞为异种细胞，可产生对机体不利的代谢产物和抗原，培养液中的胎牛血清蛋白和培养的表皮细胞膜结合，易导致植皮后的排斥反应，故这种方法目前很少应用。

    2、无滋养层培养法 特征是无滋养层细胞，使用无血清的培养液，表皮细胞可直接于培养皿底部进行增殖。该操作简单方便，形成膜片时间早，没有异种蛋白影响。目前该方法应用较广泛。

    3、气-液界面培养法 传统的表皮细胞培养法是使细胞于培养液液面以下生长，这在一定程度上阻碍了表皮细胞生发层的自然分化和基底膜的形成。而气-液界面培养法应用异体（种）真皮或真皮替代物作为基底物质，或在培养基中接种成纤维细胞形成真皮类似物，而后在气表面接种自体表皮细胞，并升至气体-液体界面处培养。表皮细胞大多数暴露于空气中，在近似生理的条件下，得到充分的分化，最终形成具有表皮层和类似真皮结构的皮肤类似物。移植后可达到长期存活的目的，且创面愈合后平滑、光亮、美观。与传统培养法相比，该培养的表皮细胞角化程度增大，具有半桥粒和基底膜结构，代表了表皮细培养技术发展的方向。