在理论上，细胞在–196 °C的液氮中可以稳定存在很多年。激活细胞死亡和分化通路的是冷冻和复苏过程。因此，复苏干细胞的时机完全取决于你自身的需要。冷冻过程需要慢而稳，而细胞复苏要很快。

    对于细胞复苏而言，速度是很有必要的。现在都在追求快速复苏。

    干细胞的试管可以放在37°C水浴中解冻，然后用生长培养基重悬。如果想除去DMSO，还可以洗几个循环。细胞复苏之后，最好用几天时间来培养，筛查它们的功能是否正常。

    如果幸运的话(你的干细胞系特别有活力)，第一次进行冻融可能会得到40%、50%甚至更高的产量。但是如果你的产量只有10%左右甚至更低，也完全用不着惊讶。方法的优化往往需要多次尝试，Cui说。

    另外计算产量不要操之过急，佛罗里达州立大学的Yan Li提醒到。最初的细胞活力可能有误导性。细胞解冻之后有时要过一会儿才开始死亡，你可能会最终失去植板的细胞。研究显示，细胞死亡在植板后大约24小时达到高峰，因此最好等一等再来计算产量。

    对于干细胞而言，复苏得到活细胞并不是我们的最终目标。关键问题是，这些细胞是否丧失了多能性。除了在显微镜下分析形态，观察细胞植板后的生长模式，他还建议在冻融循环前后用相应标记进行染色。这样我们就能够了解干细胞的分化情况。在细胞复苏后，也可以通过商业化芯片来检测拷贝数变异、表观遗传学改变和染色体畸变。

    复苏的产量低没什么大问题，我们只需要培养更多细胞就行。但是我们不能假定存活下来的细胞与原始细胞相同，特别是在产量很低的情况下。存活下来的细胞可能经过了某种选择。我们正在尝试理解这个问题。