癌症，是人类内心深处最恐惧的存在，原因就在于，绝大多数癌症都没有行之有效的治疗方法，而这也是人们将癌症称为“绝症”的主要原因。不过，随着再生医学，特别是细胞免疫疗法的问世，似乎为癌症治疗探寻到一条新的道路，让无数癌症患者欢欣鼓舞。

　　再生医学网获悉，近日，由PACT Pharma的Stefanie J.Mandl和Susan P.Foy，以及加州大学洛杉矶分校的Antoni Ribas领衔的研究团队完成了一项壮举！

　　他们使用CRISPR/Cas9基因编辑系统，在T细胞中插入了能够识别肿瘤特异性新抗原的T细胞受体（neoTCR）基因，构建了neoTCR-T细胞。首个1期临床数据表明，neoTCR-T细胞治疗安全性良好，可以在一定程度上控制难治性肿瘤的生长。

　　据了解，这是全球范围内首次通过CRISPR基因编辑技术在T细胞中插入基因，以达到个性化抗癌的目的。这一重磅研究成果发表在顶级期刊《自然》上。

　　在该研究中，研究人员对总计187名接受登记的志愿者进行了样本提取，排除掉存在组织和外周血取样失败等原因的志愿者之后，剩余的88例患者进入到了neoTCR的鉴定与发现阶段。

　　经过进一步地筛选（排除掉TCR分离失败以及TCR不符合产品选择标准的患者），共计46名患者满足neoTCR筛选标准。最后，研究人员对28名患者进行了血液单采，并对其中的16名难治性实体瘤患者（包括结直肠癌、乳腺癌和肺癌）进行了neoTCR-T治疗。

　　总的来说，neoTCR-T治疗的过程可分为两个步骤：①筛选和鉴定肿瘤特异性新抗原（neoTCR）；②提取、改造以及回输T细胞。

　　首先，研究人员对16名患者的活检标本进行了WES和RNA-seq分析，通过与参考基因组比对，鉴定出了31个到488个不等（中位数为102个）的错义体细胞突变，以及20个到236个不等（中位数为35个）的表达突变。

　　然后，结合PACT Pharma公司专有的生物信息学算法，研究人员对可能被T细胞识别的新抗原肽-HLA复合体结构进行了预测和优先级排序。

　　通过将上述步骤中筛选得到的新抗原肽与β2微球蛋白（HLA分子的轻链结构域）及HLA重链蛋白进行融合表达，研究人员生成了能够模拟天然抗原-HLA复合物的三聚体靶标蛋白。随后，通过对这些三聚体单链蛋白进行条码标记（为了后续的单细胞分析）、荧光标记以及多聚化，研究人员针对每名患者生成了一个新抗原-HLA靶标文库（数量从459个到262个不等，中位数为104个）。

　　为了验证文库中新抗原肽的有效性，研究人员进行了进一步的实验。具体来说，研究人员从患者外周血中提取CD8+T细胞，并将其与上述构建的新抗原-HLA文库共孵育，再使用超灵敏、高通量的纳米颗粒分离技术进行分析，最终验证了共计84个新抗原肽的有效性。

　　在筛选到合适的新抗原作用靶标后，研究人员就要改造T细胞了。他们采用电穿孔的转染方法，将Cas9蛋白和sgRNA直接导入由患者血液分离出的T细胞中。

　　在这一步，sgRNA能够一次性引导Cas9完成两步操作：①将T细胞内源性的TCR基因（负责编码TCR蛋白α链的TRAC基因和编码β链的TRBC基因）敲除掉；②将针对每位患者所挑选出来的最多三个neoTCR基因（上述新抗原肽验证阶段中效果最佳的候选TCR）插入到TRAC基因位点。

　　在临床研究阶段，研究人员采用了三个剂量梯度的neoTCR-T细胞进行回输治疗，并对其中两个剂量水平设置了额外进行IL-2处理对照组（IL-2可提高T细胞活性并促进其生长）。

　　结果表明，经回输治疗后，患者外周血中neoTCR细胞占比升高，且这种升高水平存在剂量效应。另外，接受额外IL-2治疗的患者，体内neoTCR的比例显著高于未进行IL-2治疗的患者，这表明，联合使用IL-2可能是提高neoTCR-T疗效的有效手段。

　　为了证明改造后的neoTCR-T细胞能够有效运输到肿瘤组织，研究人员对患者活检组织中neoTCR的互补决定区3（CDR3）序列进行了定量分析，结果表明，多名患者肿瘤部位的neoTCR比例均得到显著提高，其频率均高于回输治疗之前天然TCR的水平。

　　最后，研究人员对TCR-T治疗的毒性和疗效进行了综合分析。研究结果表明，一例患者出现了1级细胞因子释放综合征，一例出现了3级脑炎的症状，所有患者都产生了淋巴细胞消耗所导致的预期副作用。

　　从疗效来看，5名患者的病情稳定，余下11名患者疾病进展。另外，16名患者中有两名患者的肿瘤尺寸变小。

　　若要说哪项医学技术最具“魔幻性”，那肯定非基因编辑技术莫属！作为一种新兴的医疗技术，基因编辑展现出惊人实力，为无数恶性疾病与遗传疾病提供了新的治疗思路与方法。对此，再生医学网表示，随着该项研究成果问世，相信将彻底颠覆癌症治疗史。